Тест-система Eclectica psa reagent Kit разработана для количественного определения простатического специфического антигена в человеч - korshu.ru o_O
Главная
Поиск по ключевым словам:
страница 1
Похожие работы
Тест-система Eclectica psa reagent Kit разработана для количественного определения - страница №1/1


ADALTIS

Eclectica PSA System

Простатический специфический антиген (ПСА)

Кат.№ 1706400 Количество тестов: 100


Производитель:

Adaltis S.r.l.

Via Durini, 27

20122 Milano (Italy)

Tel. +39-0774-5791

Fax +39-0774-353085



www.adaltis.net
Производитель

Медицинское оборудование для

диагностики in vitro.

(применение для диагностики in

vitro)

Номер лота

Каталожный номер

Срок годности (использовать до)

Ограничение по

температуре (хранить при 2-

8ºС/2-25ºС)

Не замораживать

Количество тестов

Обратитесь к инструкции по

применению



Биологическая опасность

Опасный

Избегать воздействия прямых

солнечных лучей



Eclectica PSA реагент

Eclectica PSA Контроль 1

Eclectica PSA Контроль 2

Разбавитель проб 4 Eclectica

Промывающий раствор для

иммунохимии Eclectica



Системный промывающий

раствор Eclectica



Eclectica Субстрат

Eclectica Разделительный реагент

Eclectica Стоп-раствор

Eclectica Калибратор А

Eclectica Калибратор В

Eclectica Калибратор С

Eclectica Калибратор D

Eclectica Калибратор Е

Eclectica Калибратор F

1. Назначение

Тест-система Eclectica PSA Reagent Kit разработана для количественного определения простатического специфического антигена в человеческой сыворотке и гепаринизированной плазме на анализаторе Eclectica.


Данный метод может применяться для измерения концентраций простатического специфического антигена (ПСА) в диапазоне от 0,2 до 100 нг/мл.

2. Справка


Простатический специфический антиген (ПСА), гликопротеин с молекулярным весом 34000 дальтон, был впервые выделен авторами Wang и др. в 1979 году (1). ПСА является калликреинподобной сериновой протеазой, которая образуется исключительно эпителиальными клетками простаты. ПСА присутствует в семенной жидкости и результатом его действия является разжижение семенного сгустка (2, 3).

ПСА циркулирует в сыворотке и может быть достоверно определен радиоиммунологическим или иммуноферментным методами анализа (3, 4).

30-50% больных с доброкачественной простатической гиперплазией имеют повышенные концентрации сывороточного ПСА, в зависимости от размера простаты и степени закупорки, концентрации ПСА повышаются и у 25-92% больных раком простаты, в зависимости от объёма опухоли (5-7). Повышенные уровни сообщались в случае раковых заболеваний легких, груди, толстой кишки, прямой кишки, желудка, поджелудочной или щитовидной желез (1, 2, 8).

Пальцевое исследование прямой кишки, цистоскопическое исследование и биопсия простаты могут вызвать подъём концентрации сывороточного ПСА (5). Состояния, такие как бактериальный простатит и острая задержка мочи, также могут повысить уровень сывороточного ПСА (9-12). Поскольку ПСА находили у больных с доброкачественными новообразованиями, то не рекомендуется использование ПСА в качестве скринингового теста на карциному простаты. Однако, в сочетании с пальцевым исследованием прямой кишки и/или трансректальным ультразвуковым исследованием, он может стать жизненно важной частью программ раннего обнаружения заболевания (13).

В отношении мониторинга больных после определенной терапии, ПСА оказался чрезвычайно чувствительным опухолевым маркером. Безотносительно к виду лечения (радикальная простатэктомия, радиационная терапия или антиандрогенное лечение), ПСА точно отражает статус опухоли у пациента и имеет прогностическое значение последующего исхода; этот опухолевый маркер способен предсказать рецидив опухоли за несколько месяцев до её обнаружения другим методом. Если сравнить с простатической кислой фосфатазой, ПСА является более точным и полезным маркером во всех клинических ситуациях (14-16).

ПСА, первый органоспецифический сывороточный маркер в биологии рака, представляет собой ценный новый инструмент для клинициста, и является наиболее значимым и полезным опухолевым маркером для аденокарциномы простаты.


3. Принцип метода


Для тестирования ПСА на анализаторе Eclectica необходимы:

  1. Тест-система для определения ПСА Eclectica: специфические реагенты тест-системы Eclectica PSA Reagent Kit для выполнения тестирования и проверки калибровки.

  2. Тест-система для калибровки Общего ПСА Eclectica: для стандартизации.

  3. Тест-система Разбавитель проб 4 Eclectica: для разбавления образцов с высокой концентрацией.

  4. Тест-система общих реагентов для иммунохимии Eclectica: для реакции общей химии.

  5. Промывающий раствор для иммунохимии Eclectica: специфический промывающий раствор для иммунохимии.

  6. Системный промывающий раствор Eclectica для анализатора Eclectica.

В методике анализа Eclectica PSA используются два типа высокоспецифичных моноклональных антител в системе иммуноферментного анализа, который включает стадию магнитного твердофазного разделения. Все времена инкубации и объёмы реагентов определяются специфическим протоколом программного обеспечения. Определенные количества флуоресцеин-конъюгированных монокло-нальных антител к ПСА и моноклональных антител к ПСА, конъюгированных со щелочной фосфатазой, добавляются к образцу, контролю, или стандарту. Реакционная смесь инкубируется при 37ºС. В процессе инкубации ПСА в образце, контроле или калибраторах связывается с двумя типами моноклональных антител к ПСА, образуя «сэндвич».

В конце инкубационного периода анти-флуоресцеин, связанный с магнитными частицами, добавляется в избытке. Он быстро и специфично связывается с комплексом моноклональных антител с ПСА и осаждается в магнитном поле. После удаления жидкой фазы и промывки твердой фазы, раствор ферментного субстрата, фенолфталеин-монофосфат, добавляется в инкубационную ячейку, и каждая ячейка инкубируется при 37ºС. После инкубации, ферментная реакция останавливается добавлением стоп-раствора, а интенсивность окраски измеряется фотометрически. Интенсивность окраски прямо пропорциональна, в рамках рабочего диапазона анализа, концентрации ПСА в образце. Концентрация ПСА в образце пациента или контроле затем определяется методом интерполяции по сохраненной стандартной кривой.


4. Реагенты – подготовка и хранение


4.1 Тест-система Eclectica PSA Reagent Kit Код 1706400

Не использовать компоненты тест-системы после окончания срока годности.

Тест-система Eclectica PSA Reagent Kit содержит специфические реагенты для выполнения 100 тестов, и контроли для 5 проверок калибровки из каждого флакона.

Реагенты хранить при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке.

Информация о номере лота, сроке годности и количестве тестов содержится на параметрической карте, которая входит в состав тест-системы Eclectica PSA. Используйте считыватель параметрических карт для загрузки информации, содержащейся на карте в систему. Для получения дополнительной информации смотрите Руководство пользователя для анализатора Eclectica.



  • 2 флакона Eclectica PSA Реагент Код 1706416

2 флакона, содержащие меченные флуоресцеином и бычьей щелочной фосфатазой мышиные моноклональные антитела к ПСА в Трис буфере (< 1%) c овечьими, лошадиными, и бычьими сывороточными белками и азидом натрия (< 0,1% w/w). Реагент готов к применению и один флакон рассчитан на 50 тестов.

Хранить реагент при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. Защищать от воздействия прямых солнечных лучей.

Вскрытый реагент стабилен в течение:

- 2 месяцев при хранении в закрытом флаконе при 2-8ºС,

- 2 недель при хранении в закрытом флаконе в анализаторе Eclectica с включенным охлаждением.

После использования закройте каждый флакон своей специфической крышкой.

Смотрите раздел 7.


  • 2 флакона Eclectica PSA Контроль 1 Код 1706418

2 флакона, содержащие 1 нг/мл ПСА в бычьей сыворотке, с глицерином (> 10%), консервантами, включая азид натрия (<0,1% w/w). Флакон содержит 1 мл готового к применению контроля.

Хранить при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. В конце тестирования убрать флакон и хранить его закрытым при 2-8ºС, если контроль не используется в последующие 24 часа или в тот же день.

Вскрытый контроль стабилен в течение:

- 2 месяцев при хранении в закрытом флаконе при 2-8ºС,

- 1 недели при хранении в закрытом флаконе в анализаторе Eclectica с включенным охлаждением.

После использования закройте каждый флакон своей специфической крышкой.

Смотрите раздел 7. Паспорт безопасности материала предоставляется по запросу специалиста.


  • 2 флакона Eclectica PSA Контроль 2 Код 1706419

2 флакона, содержащие 30 нг/мл ПСА в бычьей сыворотке, с глицерином (> 10%), консервантами, включая азид натрия (<0,1% w/w). Флакон содержит 1 мл готового к применению контроля.

Хранить реагент при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. Защищать от воздействия прямых солнечных лучей.

Вскрытый контроль стабилен в течение:

- 2 месяцев при хранении в закрытом флаконе при 2-8ºС,

- 2 недель при хранении в закрытом флаконе в анализаторе Eclectica с включенным охлаждением.

После использования закройте каждый флакон своей специфической крышкой.

Смотрите раздел 7.

5. Необходимые реагенты, поставляемые отдельно


5.1 Тест-система для калибровки Eclectica PSA Calibration Kit Код 1706417

Тест-система для калибровки Eclectica PSA Calibration Kit содержит шесть флаконов, достаточных для построения 5 калибровочных кривых. Калибраторы ПСА помечены от А до F и содержат приблизительно 0- 1- 3- 10- 30- 100 нг/мл ПСА в бычьей сыворотке, с глицерином (> 10%), консервантами, включая азид натрия (<0,1% w/w). Флакон содержит 1 мл готового к применению калибратора.

Точная концентрация каждого калибратора содержится на параметрической карте, которая входит в состав тест-системы для калибровки Общего ПСА. Используйте считыватель параметрических карт для загрузки информации, содержащейся на карте в систему. Для получения дополнительной информации смотрите Руководство пользователя для анализатора Eclectica.

Необходимо, чтобы флаконы достигли комнатной температуры (18-25ºС) и перед применением содержимое флаконов следует осторожно перемешать.

Хранить калибраторы при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке.

В конце тестирования убрать флакон и хранить его закрытым при 2-8ºС, если калибратор не используется в последующие 24 часа или в тот же день.

Вскрытый калибратор стабилен в течение:

- 2 месяцев при хранении в закрытом флаконе при 2-8ºС,

- 1 недели при хранении в закрытом флаконе в анализаторе Eclectica с включенным охлаждением.

После использования закройте каждый флакон своей специфической крышкой.

Смотрите раздел 7. Паспорт безопасности материала предоставляется по запросу специалиста.

5.2 Разбавитель проб 4 Eclectica Код 1706658

Образцы с уровнем ПСА выше 100 нг/мл, следует тестировать с использованием тест-системы Разбавитель проб 4 Eclectica. Разбавления могут быть выполнить вручную или онлайн на анализаторе Eclectica. Чтобы выполнить онлайн разбавления, необходимо снять крышку флакона с разбавителем и флакон поместить в позицию 4 в роторе для образцов Eclectica. Дополнительно, можно выполнить разбавления вручную и результаты умножить на фактор разбавления.



  • Разбавитель проб 4 Eclectica содержит 3 флакона. Каждый флакон содержит 20 мл лошадиной сыворотки с азидом натрия (<0,1% w/w). Разбавитель проб 4 Eclectica можно использовать при тестировании С-пептида на анализаторе Eclectica для выполнения разбавлений вручную или онлайн. Разбавитель готов к применению и хранится при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. Разбавитель стабилен в течение 1 недели, после вскрытия и при хранении на анализаторе Eclectica.

Информация о номере лота, сроке годности и общем объеме содержится на параметрической карте, которая входит в состав упаковки тест-системы Разбавитель проб 4. Используйте считыватель параметрических карт для загрузки информации, содержащейся на карте в систему. Для получения дополнительной информации смотрите Руководство пользователя для анализатора Eclectica.

Смотрите раздел 7. Информацию о безопасном обращении с реагентом смотрите в паспорте безопасности.



5.3 Тест-система общих реагентов для иммунохимии Eclectica Код 1700010

На анализаторе Eclectica используются 3 общих реагента для всех иммуноанализов.

Каждый флакон содержит достаточный объём для выполнения 200 тестов при использовании анализатора в стандартных условиях (2 еженедельных запуска и 10 ежедневных запусков).

Хранить при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке.

Необходимо, чтобы компоненты тест-системы общих реагентов для иммунохимии достигли комнатной температуры (18-25ºС) перед установкой на борт анализатора. Вскрытые общие реагенты стабильны в течение двух недель (при хранении при 2-8ºС или на борту анализатора Eclectica).

Информация о номере лота, сроке годности и количество тестов для каждого общего реагента содержится на параметрической карте, которая входит в состав тест-системы общих реагентов для иммунохимии. Используйте считыватель параметрических карт для загрузки информации, содержащейся на карте в систему. Для получения дополнительной информации смотрите Руководство пользователя для анализатора Eclectica.



  • 1 флакон Eclectica Разделительный реагент Код 1700004

Реагент содержит овечью анти-флуоресцеиновую сыворотку, связанную с магнитными частицами (0,6% w/v), и белок бычьей сыворотки в буфере с консервантами, включая азид натрия (<0,1% w/w). Реагент готов к применению. Перед тестированием перемешать тщательно, но аккуратно, чтобы получилась равномерная суспензия магнитных частиц. Не использовать магнитную мешалку. Хранить при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. Вскрытый Реагент стабилен в течение двух недель (при хранении при 2-8ºС или на борту анализатора Eclectica).

Не замораживать. Смотрите раздел 7.

  • 1 флакон Eclectica Субстрат Код 1700002

Содержит фенолфталеин-монофосфат в качестве ферментного кофактора и консервант в буферном растворе. Содержит 2,2’-иминодиэтанол (> 10%). Реагент готов к применению. Хранить при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. Избегать воздействия прямых солнечных лучей.

Вскрытый Реагент стабилен в течение двух недель (при хранении при 2-8ºС или на борту анализатора Eclectica).

Смотрите раздел 7. Информацию о безопасном обращении с реагентом смотрите в паспорте безопасности.

Внимание: реагент относится к классу опасности Xn: R 41 48/22, S 3 26 36/37/39 60.



Коды риска:

R 41 риск серьезного поврежде-

ния глаз.



R 48/22 опасный: опасно для

здоровья при длительном контакте и проглатывании.



Коды безопасности:

S 3 хранить в холодном месте.

S 26 в случае попадания в глаза,

сразу промыть проточной водой и обратиться за медицинской помощью.



S 36/37/39 надевать спецодежду,

перчатки и защитные очки.



S 60 данный материал и его контейнер

следует утилизировать как опасные отходы.



  • 1 флакон Eclectica Стоп-раствор Код 1700003

Содержит хелатирующий агент и гидрооксид натрия (< 1% w/w) в буфере, рН >10. Реагент готов к применению. Хранить при температуре 2-25ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. Вскрытый Реагент стабилен в течение двух недель (при хранении при 2-8ºС или на борту анализатора Eclectica).

Внимание: реагент относится к классу опасности Xi: R 36/38, S 23 26 37 60.

Смотрите раздел 7. Информацию о безопасном обращении с реагентом смотрите в паспорте безопасности.

Коды риска:

R 36/38 раздражает глаза и кожу.

Коды безопасности:

S 23 не вдыхать аэрозоль.

S 26 в случае попадания в глаза, сразу

промыть проточной водой и обратиться за медицинской помощью.



S 37 надевать защитные перчатки.

S 60 данный материал и его флакон

следует утилизировать как опасные отходы.



5.4 Промывающий раствор для иммунохимии Eclectica Код 1700001Р4

Один флакон содержит 900 мл Трис буфера (> 1%) и консервант.

Раствор готов к применению. Хранить при температуре 2-25ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. Вскрытый раствор стабилен в течение двух недель (при хранении при 2-8ºС или на борту анализатора Eclectica).

Смотрите раздел 7. Паспорт безопасности предоставляется по запросу.



5.5 Системный промывающий раствор Eclectica Код 1750102Р4

Один флакон содержит 1600 мл готового к применению карбонатного буфера и антибактериальный консервант. Хранить при температуре 2-25ºС до срока годности, указанного на этикетке.

После вскрытия раствор стабилен в течение двух недель (при хранении при 2-25ºС или на борту анализатора Eclectica).

Смотрите раздел 7. Паспорт безопасности предоставляется по запросу.



6. Необходимые материалы и оборудование

6.1 Предоставленные Реагенты для тестирования

Тест-система Eclectica PSA Reagent Kit.

Тест-система для калибровки Eclectica PSA Calibration Kit.

Тест-система Разбавитель проб 4 Eclectica: для разбавления образцов с высокой концентрацией.

Тест-система общих реагентов для иммунохимии Eclectica.

Промывающий раствор для иммунохимии Eclectica.

Системный промывающий раствор Eclectica.

Комплект растворов для промывки анализатора Eclectica (код 1700006 – информацию о составе и применении читайте в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica).



6.2 Необходимое Оборудование/ принадлежности, поставляемые отдельно

Анализатор иммунохимический Eclectica.

Одноразовые блоки кювет.

Пробирки кат. № 18056 (дополнительную информацию читайте в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica).



7. Меры предосторожности и ограничения

Для in vitro диагностики.

Только квалифицированный лабораторный персонал должен использовать данный тест и проведение процедуры тестирования должно быть в соответствии со стандартом GLP (правила лабораторной практики).

Запрещается смешивать реагенты из разных лотов.

Все реагенты следует использовать на анализаторах, которые находятся в хорошем рабочем состоянии и тщательно очищены с помощью Eclectica комплекта растворов для промывки (код 1700006).

Дополнительную информацию об обслуживании и инструкциях по применению читайте в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica.



7.1 Меры безопасности

1. Не пипетировать реагенты ртом.



2. Не курить, не есть, и не использовать косметику в помещениях, где обрабатываются образцы пациентов или реагенты тест-систем.

3. Кожу порезов и других повреждений следует тщательно защищать соответствующей водостойкой повязкой.

4. Следует избегать самозаражения, попадания брызг на слизистые оболочки, или образования аэрозолей.

5. Следует надевать лабораторные перчатки при обработке образцов пациентов.

7.2 Предупреждение о потенциальной биологической опасности

Некоторые реагенты системы Eclectica содержат материал животного происхождения, даже если указано, что он получен от здоровых животных, рекомендуется обращаться с реагентами, следуя тем же мерам предосторожности, что и в работе с потенциально инфекционными образцами.

Некоторые реагенты, используемые в системе Eclectica, могут быть получены из пула сывороток крови человека. Каждая порция крови, использованная для создания пула сывороток, была проверена утвержденными методами FDA (Управление по контролю качества продуктов питания и лекарственных средств) на отсутствие сифилиса, поверхностного антигена вируса гепатита B (HBsAG), вируса гепатита C (HCV) и антител против ВИЧ (HIV 1 + 2). Поскольку, никакой тест не может давать полной гарантии отсутствия вируса гепатита B, ВИЧ и другие инфекционных агентов, то указанные реагенты следует рассматривать как потенциально опасные и обращаться с ними, следуя тем же мерам предосторожности, что и при работе с образцами сыворотки или плазмы. Некоторые реагенты, такие как калибраторы и контроли, могут содержать материал тканей человеческого происхождения. В настоящее время, отсутствует стандартный тест на наличие ВИЧ в таком материале. Поэтому рекомендуется и такие реагенты рассматривать как потенциально опасные.

С такими материалами следует обращаться в соответствии с правилами лабораторной практики, как описано в документе CDC (Центр по контролю заболеваемости, Атланта, США): Универсальные меры предосторожности для предотвращения передачи вируса иммунодефицита человека, вируса гепатита B и других передающихся через кровь патогенов в учреждениях здравоохранения «MMWR» 37:377-387, 1999.



7.3 Опасные химические вещества - Предупреждение

Некоторые реагенты относятся к опасным химическим веществам, согласно классификатору. Для безопасной работы рекомендуется внимательно прочитать информацию в Паспорте безопасности.



7.4 Ограничения

Не использовать ЭДТА и цитрат натрия в качестве антикоагулянта, поскольку они ингибируют ферментативную реакцию. Помутнение, агрегация и выпадение осадка в любом из Eclectica реагентов указывает на возможное ухудшение их качества. Обратитесь за консультацией к вашему региональному дистрибьютору. Как и во всех анализах, на результаты данного теста могут повлиять факторы, присутствующие в образцах некоторых пациентов.

Как в любом иммуноанализе, на результаты могут повлиять факторы, присутствующие в сыворотке пациента. Хотя информация о реагентах была тщательно изучена для того, чтобы уменьшить влияние гетерофильных антител и неспецифических белковых связываний, возможная недостоверность одного образца не может быть исключена, как для всех «Сэндвич» систем.

Для диагностических целей, результат, полученный при данном тестировании всегда должен использоваться совместно с клинической картиной, анамнезом пациента и другими лабораторными исследованиями. Реагенты различных лотов нельзя смешивать вместе.

Применение реагентов, расходных материалов, и запасных частей, отличающихся от поставляемых уполномоченным дистрибьютором, может привести к неправильным результатам.

Следуйте инструкциям по применению, поскольку любая модификация может повлиять на результат.

Использование реагентов, расходных материалов или запасных частей, поставляемых не официальным дистрибьютором, может привести к получению неправильного результата.

Пациенты, получающие терапию моноклональными антителами (мышиными) для диагностических или терапевтических целей могут иметь антимышиные антитела (НАМА). Присутствие НАМА в образце может дать как ложно положительные (высокие), так и ложно отрицательные (низкие) значения при использовании системы с моноклональными антителами. Образцы, содержащие НАМА, не должны анализироваться на системе Eclectica.



8. Отбор образца и хранение

Следующие рекомендации для обработки и хранения образцов крови выпущены Национальным комитетом по клиническим лабораторным стандартам (NCCLS – Doc. H18-A):

- Забор образцов крови проводить с соблюдением стандартных мер предосторожностей при отборе биологических жидкостей.

- В случае образцов сыворотки, обеспечить полную коагуляцию образцов перед центрифугированием:



Примечание: Центрифугирование образцов сыворотки до окончания коагуляции может привести к появлению фибрина. Чтобы избежать неверных результатов из-за присутствия фибрина, следует убедиться в том, что процесс коагуляции полностью завершен перед центрифугированием образцов. Некоторые образцы, в частности образцы пациентов, получающих терапию антикоагулянтами, могут потребовать более длительного времени для коагуляции.

- Пробирки следует хранить закрытыми в вертикальном положении.

- Не использовать образцы, которые находились при комнатной температуре более 8 часов

- Герметически запечатать и охладить образцы (2-8ºС), если раскапывание не выполнено в течение 8 часов.

- Заморозить образцы при температуре -20ºС или ниже, если тестирование не выполнено в течение 48 часов.

- Замораживать образцы только один раз, после размораживания, их следует тщательно перемешать.

Для осветления липемических образцов рекомендуется применение ультрацентрифуги. Гемолизированные образцы могут указывать на несоответствующую обработку образца перед доставкой его в лабораторию; по этой причине, результаты следует интерпретировать с осторожностью.

Требуемый объём: составляет 0,05 мл образца для каждого определения. Этот объём не включает в себя мертвый объём (неиспользуемый объём в пробирке с образцом) или дополнительный объём, требуемый для повторов или для выполнения других тестов для того же самого образца. Дополнительную информацию по определению минимального требуемого объёма читайте в разделе «Требования к объёму образца» в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica.

Перед помещением образца на борт анализатора следует проверить образцы на отсутствие в них фибрина, частиц, и пузырьков воздуха.



8.1 Сыворотка

Внести 5 мл венозной крови в стеклянную или пластиковую пробирку без добавок. Позволить крови свернуться при комнатной температуре (18-25ºС). Отцентрифугировать, и отделить сывороточную фракцию.



8.2 Плазма

Внести 5 мл венозной крови в стеклянную или пластиковую пробирку, содержащую гепарин в качестве антикоагулянта. Отцентрифугировать, и отделить плазменную фракцию.



Не использовать ЭДТА- или цитратную плазму.

9. Процедура анализа

Руководство пользователя для анализатора Eclectica подробно описывает процедуру подготовки, установки, стандартизации, тестирования и контроля качества. Следует выполнять все стандартные процедуры обслуживания, как описано в Руководстве пользователя для получения оптимальных результатов анализа.



  • Тест-система для определения аналита, которая включает также контроли 1 и 2, идентифицируется по номеру лота, специфичного для данного реагента.

  • Каждый лот тест-систем можно загрузить только с помощью соответствующей параметрической карточки, входящей в состав реагентов.

  • Нельзя смешивать реагенты разных лотов.

  • Калибровка метода специфична для конкретного лота реагентов.

  • Для каждого нового лота реагентов определяется основная калибровочная кривая (референсная кривая), которую получают при выполнении серии тестов на различных анализаторах.

  • Данные контролей (в единицах OD и концентрации), рассчитанные по референсной кривой, хранятся на параметрической карточке, поставляемой в упаковке тест-системы, и эти данные представляют «целевые» значения.

  • Данные закодированного лота загружаются в анализатор Eclectica при считывании информации с параметрической карточки.

  • Данные контролей 1 и 2, в единицах сигнала, полученные экспериментально, сравниваются с соответствующим «ожидаемым сигналом».

  • Достоверность калибровочной таблицы оценивается в отношении группы параметров качества и, в случае, когда результаты принимаются, таблица будет загружена в память, связанную с лотом реагентов.

9.1 Рекомендуемый интервал уточнения кривой: 3 недели.

Примечание: Проверка калибровки (посредством Контроля 1 и Контроля 2) необходима по истечении 3 недель, при загрузке нового лота специфических реагентов или тест-системы общего назначения, при замене некоторых компонентов системы, или когда измеренная концентрация контрольной сыворотки не соответствует спецификации.

9.2 Время первого результата: 76 минут.

10. Контроль качества

Каждой лаборатории рекомендуется регулярно использовать материалы контроля качества и установить свои собственные контрольные диапазоны.

Необходимо проводить измерение многоуровневых контролей при каждом тестировании ПСА. Значения ПСА, полученные для контрольных материалов, не должны часто выходить за границы контрольных диапазонов, установленных в каждой лаборатории. Если эти контрольные значения регулярно попадают за границы установленных контрольных диапазонов, то следует проверить правильность работы прибора (смотрите раздел «Устранение неисправностей» в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica).

11. Расчеты и результаты

Значения образца рассчитываются программой пользователя Eclectica, используя референсную калибровочную кривую и измерение контролей, во время тестирования. Программа анализатора Eclectica подтверждает, что хранящаяся эталонная кривая соответствует специфическим критериям анализа.

В дополнение к имеющейся действительной референсной кривой, измеряемые контроли должны быть в пределах, установленных программой для результатов образцов, чтобы быть распечатанными анализатором Eclectica.

12. Ожидаемые значения

Распределение значений ПСА в крови доноров и у пациентов со злокачественными и незлокачественными образованиями показано в следующей таблице:






Распределение значений ПСА (%)




n

0-4 нг/мл

4,01-10 нг/мл

10,01-20 нг/мл

20,01-40 нг/мл

>40 нг/мл

Доноры крови

Мужчины <40 лет

100

100

0

0

0

0

Мужчины >40 лет

100

93

6

0

1

0

Мужчины >60 лет

50

90

10

0

0

0

Мужчины общая

200

96,5

3

0

0,5

0

Женщины

100

100

0

0

0

0

Злокачественная опухоль*

Простаты



















Стадия А

20

55

25

15

0

5

Стадия В

20

40

10

20

20

10

Стадия С

20

35

15

25

10

15

Стадия D

20

0

5

0

20

75

ЖКТ

10

80

10

10

0

0

Легких

10

90

0

10

0

0

Молочной железы

10

100

0

0

0

0

Мочеполовой системы

10

90

10

0

0

0

Почек

2

100

0

0

0

0

Другая

10

100

0

0

0

0

Незлокачественные опухоли

ДГП

50

82

14

4

0

0

Мочеполовой системы

50

94

2

0

0

4

Другая

34

91

0

3

0

6

* Включает леченых и нелеченых больных

** Доброкачественная гиперплазия простаты (ДГП)

Уровень ПСА в 4 нг/мл обычно используется для определения рака простаты или другого простатического заболевания.

Следуя Руководству по клинической практике в онкологии «Раннее определение рака простаты» VI 2006, мужчины со значениями ПСА больше 2,5 нг/мл, должны пройти дополнительное тестирование, такое как измерение соотношения процента Свободного ПСА и Общего ПСА или измерение изменений значений ПСА во времени (как биопсия простаты).

Более 20% случаев рака простаты развиваются, когда уровни ПСА находятся в нормальном диапазоне, и существенная группа мужчин с уровнями ПСА в диапазоне от 2,5 до 4 нг/мл имеют рак простаты.

12.1 Факторы, связанные с повышенными значениями

Повышенные уровни ПСА наблюдали с высокой частотой в сыворотке пациентов с раком простаты (5-7). О повышенных уровнях ПСА также сообщалось при разнообразных незлокачественных заболеваниях простаты, таких как доброкачественная гиперплазия простаты, бактериальный простатит и острая задержка мочи (9-12).

Исследования простаты (биопсия простаты, ректальное исследование, массаж простаты) могут вызвать повышение концентраций сывороточного ПСА (5).

Показано, что эндогенные факторы, например, человеческие анти-мышиные антитела, в человеческой сыворотке могут приводить к ложно завышенным значениям антигена в иммуноанализах (18).



12.2 Факторы, связанные с пониженными значениями

Радикальная простатэктомия может дать в результате малозаметные или неопределяемые концентрации сывороточного ПСА (5).

Гормональная или радиационная терапия карциномы простаты может вызвать понижение концентраций сывороточного ПСА (6, 15, 16).

Показано, что эндогенные факторы, например, человеческие анти-мышиные антитела, в человеческой сыворотке могут приводить к ложно завышенным значениям антигена в иммуноанализах (18).



13. Технические характеристики

13.1 Диапазон калибровки

0,2 - 100 нг/мл


13.2 Эффект прозоны

При концентрациях до ПСА 25000 нг/мл эффект прозоны не наблюдался.

13.3 Воспроизводимость

Воспроизводимость теста Eclectica PSA была определена повторяющимся анализом образцов в четырех повторах в течение 20 дней, один анализ в день, всего 20 анализов и 80 повторов, используя два анализатора. Полученные результаты показаны в следующей таблице. Значения выражены в нг/мл.



Образец

Среднее

SD

CV, %

Внутрисерийная

1

2,7

0,15

5,6

2

55,13

3,67

6,7

Межсерийная

1

2,7

0,12

4,6

2

55,13

3,21

5,8

Общая

1

2,7

0,2

7,2

2

55,13

4,88

8,8

Воспроизводимость теста Eclectica PSA была также определена повторяющимся анализом образцов с разным содержанием ПСА и протестирована в четырех повторах в течение 10 дней, один анализ в день, всего 10 анализов и 40 повторов, используя два анализатора. Полученные результаты показаны в следующей таблице. Значения выражены в нг/мл.

Образец

Среднее

SD

CV, %

Внутрисерийная

1

1,75

0,09

5,3

2

12,19

0,33

2,7

3

23,1

0,66

2,8

Межсерийная

1

1,75

0,11

6,1

2

12,19

0,37

3

3

23,1

0,72

3,1

Общая

1

1,75

0,14

8,1

2

12,19

0,5

4,1

3

23,1

0,98

4,2

13.4 Разбавление

Пять образцов сыворотки, содержащие высокие концентрации ПСА были вручную разбавлены Eclectica Разбавителем 4 и протестированы. Полученные результаты показаны в следующей таблице.



Фактор разбавления

n

% неразбавленного значения

SD

1

5

N.A.

N.A.

2

5

93,6

1,98

4

5

92

4,92

8

5

95

6,39

16

5

97,2

8,45

32

5

100,5

11,94

Три образца сыворотки, содержащие высокие концентрации ПСА были автоматически разбавлены на борту анализатора Eclectica Разбавителем 4 и протестированы. Полученные результаты показаны в следующей таблице.

Факторы разбавления 2, 10 и 25 можно считать «Верными» в протоколе анализа Eclectica Общий ПСА.



Фактор разбавления

n

% неразбавленного значения

SD

1

3

N.A.

N.A.

2

3

99,7

1,39

10

3

93,8

5,03

15

3

103

4,58

13.5 Чувствительность

Предел чувствительности теста равен 0,2 нг/мл, и определяется как концентрация ПСА, эквивалентная средней оптической плотности Калибратора А плюс два стандартных отклонения, основанных на 20 повторах образца с нулевым аналитом.



13.6 Специфичность

Перекрестная реактивность теста ПСА была оценена измерением различимого ответа анализа на разнообразные обладающие потенциальной перекрестной реактивностью аналиты.

Не наблюдалось заметной перекрестной реакции, ни с простатической кислой фосфатазой (до 1 мг/л), ни со следующими химиотерапевтическими лекарственными средствами: Циклофосфамид (до 250 мг/л), Доксорубицин гидрохлорид (до 7 мг/л), Метотрексат (до 10 мг/л), Мегестрол ацетат (до 40 мг/л), Винбластин (до 5 мг/л), Винкристин (до 5 мг/л), Блеомицин (до 10 мг/л), Цисплатин (до 60 мг/л), Актиномицин (до 5 мг/л), Диэтилстильбэстрол (до 1 мг/л), и Эстрамустин фосфат (до 80 мг/л).

13.7 Калибровка

Тест Eclectica PSA калибруется по Простатическому Специфическому Антигену Первого Международного Стандарта NIBSC 96/670, содержащему семенную плазму с комплексом ПСА-АХТ (90%) и Свободный ПСА (10%).

Соотношение 90:10 является характерным соотношением форм ПСА, обнаруживаемым в сыворотке пациентов с раком простаты.

Одна ампула Международного Стандарта ВОЗ, код 96/670, была восстановлена, согласно инструкции для применения, и разбавлена Eclectica Разбавителем 4. Сравнили результаты, полученные при использовании тест-системы для калибровки Eclectica PSA и Международноого Стандарта ПСА. С помощью анализа линейной регрессии получены следующие результаты:

у = 1,06

R = 1


x = ПСА ВОЗ, код 96/670

у = Тест-система для калибровки Eclectica PSA

Коэффициент пересчета:

1 нг/мл Eclectica ПСА = 1,06 нг/мл ПСА Международного Стандарта NIBSC 96/670.



13.8 Сравнение метода

Метод Eclectica PSA сравнивали с эталонными методами, используя анализ линейной регрессии. Используемые образцы находились в пределах рабочего диапазона анализа. Получены следующие результаты:

Y = 1,01 X1 – 0.08

R = 0,975

X1 среднее = 2,79 нг/мл эталонный метод 1 PSA

Y среднее = 2,73 нг/мл Eclectica PSA

n = 89

Y = 0,82 X2 + 0,08



R = 0,958

X2 среднее = 3,26 нг/мл эталонный метод 2 PSA

Y среднее = 2,75 нг/мл Eclectica PSA

n = 88


14. Литература

1. Wang, M.C., Valenzuela L.A., Murphy, G.P., and Chu, T.M., Purification of a human prostate-specific antigen, Invest. Urol. 17: 159, 1979.

2. Nadij, V., Tabei, S.Z., Castro, A., Chu, N.V., Murphy, G.P., Wang, M.C., Morales, A.R., Prostate-specific antigen: an immunohistologic marker for prostatic neoplasms. Cancer 48: 1229, 1981.

3. Frankel, A.E., Rouse, R.V., Wang, M.C., Chu, T.M., Herzenberg, L.A., Monoclonal antibodies to a human prostate antigen. Cancer Res. 42: 3714, 1982.

4. Kuriyama, M., Wang, M.C., Papsidero, L.D., Killian, C.S., Shimano. T., Valenzuela, L., Nishiura, T., Murphy, G.P., Chu, T.M., Quantitation of prostate-specific antigen in serum by a sensitive enzyme immunoassay. Cancer Res. 40: 4568, 1980.

5. Stamey, T.A., Yang, N., Hay, A.R., McNeal, J.E., Freiha, F.S., Redwine, E., Prostate-specific antigen as a serum market for adenocarcinoma og the prostate. N. Engl. J. Med317: 909, 1987.

6. Hudson, M.A., Banhson, R.R., Catalona, W.J., Clinical use of prostate specific antigen in patients with prostate cancer. J. Urol. 142, 1989.

7. Partin, A.W., Carter, H.B., Chan D.W., Epstein, J., Oesterling, J., Rock, R., Weber, J., Walsh, P., Prostate specific antigen in the staging of localized prostate cancer: influence of tumor differentiation, tumor volume and benign hyperplasia. J. Urol. 143: 747, 1990.

8. Wang, M.C., Papsidero, L.D., Kuriyama, V., Valenzuela L.A., Murphy, G.P., and Chu, T.M., Prostatic antigen: a new potential marker for prostate cancer. Prostate 2:89, 1981.

9. Stamey, T.A., Prostate specific antigen in the diagnosis and treatment of adenocarcinoma of the prostate. Monogr. Urol. 10: 49, 1989.

10. Lindstedt, G., Jacobsson, A., Lundberg, P.A., Hedelin, H., Petterson, S., Unsgaard, B., Determination of prostate-specific antigen in serum by immunometric assa. Clin. Chem. 36: 53, 1990.

11. Armitage, T.G., Cooper, E.H., Newling, W.W., Robinson, M.R.G., Appleyard, I., The value of the measurement of serum prostate specific antigen in patients with benign prostatic hyperplasia and untreated prostate cancer. Brit. J. Urol. 62: 584, 1988.

12. Seamonds, B., Yang, N., Anderson, K., Whitaker, B., Shaw, L.M., Bollinger, J.R., Evaluation of prostate-specific antigen and prostatic acid phosphatase as prostate cancer markers. Urology, 28: 472, 1986.

13. Cooner, W.H., Mosley, B.R., Rutherford, C.L.Jr., Beard, J., Pond, H., Terry, W., Igel, T., Kidd., D., Prostate cancer detection in a clinical urological practice by ultrasonography, digital rectal examination and prostate specific antigen. J. Urol. 143: 1146, 1990.

14. Oesterling, J.E., Chan, D.W., Epstein, J.I., Kimball, A.W.Jr., Brizek, D.J., Rock, R.C., Brendler, C.B., Walsh, P.C., Prostate-specific antigen in the preoperative and postoperative evaluation of localized prostatic cancer treated with radical prostatectomy. J. Urol. 139: 766, 1998.

15. Stamey, T.A., Kabalin, J.N., Ferrari, M., Prostate specific antigen in the diagnosis and treatment of adenocarcinoma of the prostate. III. Radiation treated patients. J. Urol. 141: 1084, 1989.

16. Stamey, T.A., Kabalin, J.N., Ferrari, M., Yang, N., Prostate specific antigen in the diagnosis and treatment of adenocarcinoma of the prostate. IV. Anti-androgen treated patients. J. Urol. 141: 1088, 1989.

17. Kinders, R.J., Hass, G.M., Interference in immunoassay by human anti-mouse antibodies. Eur. J. Cancer 26 (5): 647, 1990.

18. Boscato, L.M., Stuart, M.C., Incidence and specificity of the interference in two-site immunoassays. Clin. Chem. 32 (8): 1491, 1986.

19. Prostate cancer Early Detection. NCN Practice Guideliness in Oncology v. 1 2066.