Бюллетень №5 Май 2014 Официальная информация сайтов воз, сdс, мэб и др - korshu.ru o_O
Главная
Поиск по ключевым словам:
Похожие работы
Название работы Кол-во страниц Размер
Семинар для руководителей предприятий, оказывающих услуги по химической... 1 74.25kb.
Еженедельный бюллетень по информационному мониторингу проявлений... 5 1127.28kb.
Руководство разработчика Общие сведения Требования к установке Установка 1 150.18kb.
Информация о выставках и ярмарках, которые будут проходить в Украине... 3 573.96kb.
Техническое задание на разработку веб-системы (сайта) г. Белгород... 1 68.92kb.
Рассказывается о наиболее популярных сервисах для создания бесплатных... 1 15.07kb.
«Морской Бюллетень – Совфрахт» Daily 1 289.46kb.
Бюллетень Совфрахт Daily стр. 19. 04. 2015 Создано ruslink 1 254.81kb.
Бюллетень Совфрахт Daily стр. 30. 04. 2015 Создано ruslink 1 112.68kb.
Бюллетень Совфрахт Daily стр. 19. 04. 2015 Создано ruslink 1 121.58kb.
Тур по спеццене в израиль 25. 02. 2014 04. 03. 2014 2 ночи Тель Авив... 1 22.97kb.
Виза для деловых и туристических поездок 1 149.41kb.
Инструкция по работе с сервисом «sms-платеж» 1 218.94kb.

Бюллетень №5 Май 2014 Официальная информация сайтов воз, сdс, мэб и др - страница №4/5



Страх усиливается по мере увеличения числа случаев заболевания Эбола в Гвинее. Fear spreads as number of Ebola cases in Guinea rises. Gulland A. BMJ. 2014 Apr 8;348:g2644.

  • Высокопроизводительные системы обратной генетики на основе люциферазы для выявления ингибиторов вирусов Марбург и Эбола. High-throughput, luciferase-based reverse genetics systems for identifying inhibitors of Marburg and Ebola viruses. Uebelhoer LS, Albariño CG, McMullan LK, Chakrabarti AK, Vincent JP, Nichol ST, Towner JS. Antiviral Res. 2014 Apr 5;106C:86-94.

    Реферат: Вирус Марбург (MARV) и Эбола вирус (EBOV), члены семьи Filoviridae, представляют собой серьезную проблему для здравоохранения в мире. В настоящее время не существует лицензированных терапевтических средств лечения филовирусных инфекций, которые вызывают почти 90% смертность в случае заболевания людей. В целях разработки противовирусных препаратов против этих вирусов мы создали две различные скрининговые платформы на базе систем обратной генетики MARV и EBOV, которые экспрессируют секретируемую люциферазу Gaussia (gLuc). Первая платформа представляет собой репликон мини-генома для скрининга ингибиторов вирусной репликации с помощью количественного определения gLuc в условиях BSL-2. Вторая платформа является дополнением к первой и экспрессируют gLuc в качестве продукта репортерного гена, кодируемого в рекомбинантном инфекционном MARV и EBOV, тем самым позволяя осуществлять быстрое количественное определение роста вирусов во время лечения противовирусными соединениями. Мы охарактеризовали эти вирусы путем сравнения активности люциферазы при продукции вируса и оценили активность люциферазы как подлинной меры для определения роста вируса в реальном времени. В качестве доказательства концепции мы адаптируем как мини-геном, так и платформы на основе инфекционного вируса к высокопроизводительным форматам и демонстрируем эффективность нескольких антивирусных соединений. Мы предполагаем, что оба метода окажутся весьма полезным при разработке антифиловирусных терапевтических средств, а также в фундаментальных исследованиях жизненного цикла филовирусов.

    1. Западная Африка пытается сдержать вспышку Эбола. West Africa struggles to contain Ebola outbreak. Green A. Lancet. 2014 Apr 5;383(9924):1196

    2. Одобренные для клинического применения препараты амиодарон, дронедарон и верапамил ингибируют вхождение филовирусов в клетки. The clinically approved drugs amiodarone, dronedarone and verapamil inhibit filovirus cell entry. Gehring G, Rohrmann K, Atenchong N, Mittler E, Becker S, Dahlmann F, Pöhlmann S, Vondran FW, David S, Manns MP, Ciesek S, von Hahn T. J Antimicrob Chemother. 2014 Apr 7. [Epub ahead of print]

    Реферат: ЦЕЛИ:

    Филовирусы - вирусы Эбола и Марбург - вызывают тяжелый синдром геморрагической лихорадки у людей, против которого не существует специфического лечения. Поскольку филовирусы для вхождения в клетки используют сложный путь, зависящий от многочисленных клеточных факторов, мы предположили, что могут существовать препараты, уже одобренные для использования у человека при других заболеваниях, которые могут вмешиваться в сигнальную трансдукцию или другие клеточные процессы, необходимые для вхождения вирусов, и, следовательно, обладают антифиловирусными свойствами.

    МЕТОДЫ:

    Мы использовали аутентичные филовирусы и лентивирусные частицы, псевдотипированные с филовирусными гликопротеинами, для выявления и характеристики таких соединений.

    РЕЗУЛЬТАТЫ:

    Мы обнаружили, что амиодарон, ингибитор мультиионных каналов и антагонист адренорецепторов, является мощным ингибитором вхождения филовирусов в клетки в концентрациях, которые обычно достигаются в сыворотке человека во время лечения аритмии. Аналогичный эффект наблюдался при применении родственного амиодарону препарата дронедарона и блокатора кальциевых каналов L-типа верапамила. Ингибирование под действием амиодарона зависело от концентрации и отмечалось у псевдовирусов в той же степени, что и у аутентичных филовирусов. Ингибирование вхождения филовирусов наблюдалось для большинства, но не для всех исследованных типов клеток и усиливалось за счет предварительной обработки клеток, что указывает на механизм действия, направленный на клетку-хозяина. Амиодарон ингибировал также ареновирус Нового Света Гуанарито, в то время как ареновирус Старого Света Ласса и члены семейств Rhabdoviridae (вирус везикулярного стоматита) и Bunyaviridae (Хантаан) проявляли значительную резистентность.

    ВЫВОДЫ:

    Блокаторы ионных каналов амиодарон, дронедарон и верапамил ингибируют вхождение филовирусов в клетки.




    1. Дополнительная информация.


    The New England Journal of Medicine. Краткий отчет (Полный перевод статьи)

    Возникновение заболевания, вызванного вирусом Эбола Заир, в Гвинее - предварительный отчет. Emergence of Zaire Ebola Virus Disease in Guinea — Preliminary Report
    Sylvain Baize, Ph.D., Delphine Pannetier, Ph.D., Lisa Oestereich, M.Sc., Toni Rieger, Ph.D., Lamine Koivogui, Ph.D., N’Faly Magassouba, Ph.D., Barrè Soropogui, M.Sc., Mamadou Saliou Sow, M.D., Sakoba Keïta, M.D., Hilde De Clerck, M.D., Amanda Tiffany, M.P.H., Gemma Dominguez, B.Sc., Mathieu Loua, M.D., Alexis Traoré, M.D., Moussa Kolié, M.D., Emmanuel Roland Malano, M.D., Emmanuel Heleze, M.D., Anne Bocquin, M.Sc., Stephane Mély, M.Sc., Hervé Raoul, Ph.D., Valérie Caro, Ph.D., Dániel Cadar, D.V.M., Ph.D., Martin Gabriel, M.D., Meike Pahlmann, Ph.D., Dennis Tappe, M.D., Jonas Schmidt-Chanasit, M.D., Benido Impouma, M.D., Abdoul Karim Diallo, M.D., Pierre Formenty, D.V.M., M.P.H., Michel Van Herp, M.D., M.P.H., Stephan Günther, M.D.
    Принадлежность авторов указана в Приложении.

    Запросы о копиях следует присылать на имя Dr. Günther, the Bernhard Nocht Institute for Tropical Medicine, Bernhard Nocht Str. 74, 20359 Hamburg, Germany, или на адрес guenther@bni.uni-hamburg.de.

    Статья опубликована 16 апреля 2014 года в NEJM.org.

    DOI: 10.1056/NEJMoa1404505

    Реферат: В марте 2014 года Всемирная организация здравоохранения была уведомлена о вспышке в Гвинее инфекционного заболевания, характеризующегося лихорадкой, тяжелой диареей, рвотой и высоким уровнем летальности. В результате вирусологического исследования было установлено, что возбудителем заболевания является вирус Эбола Заир (EBOV). Секвенирование полного генома и филогенетический анализ показали, что EBOV из Гвинеи представляет собой отдельную кладу, родственную известным штаммам EBOV из Демократической Республики Конго и Габона. Эпидемиологическое исследование выявило связь лабораторно подтвержденных случаев с предполагаемым первым смертельным случаем во время вспышки в декабре 2013 года. Это исследование указывает на возникновение нового штамма EBOV в Гвинее.
    Вспышки, вызванные вирусами родов вирус Эбола и вирус Марбург, представляют собой серьезную проблему для здравоохранения в странах Африки южнее Сахары. Заболевание, вызываемое вирусом Эбола, связано с уровнями летальности 30-90% в зависимости от вида вируса. Специфические условия в больницах и общинах Африки способствуют передаче заболевания от человека человеку. Три вида вируса Эбола вызвали крупные вспышки в Африке южнее Сахары: EBOV, вирус Эбола Судан и недавно описанный вирус Эбола Бундибуджио.1, 2 Эпидемии произошли в Демократической Республике Конго, Судане, Габоне, Республике Конго и Уганде. Вирус Эбола Рестон циркулирует на Филиппинах. Он вызывал заболевание у приматов, но не у людей.3 Пятый вид, вирус Эбола леса Тай был зарегистрирован в одном случае заражения человека в результате контакта с инфицированным шимпанзе из леса Тай на Берегу Слоновой Кости.4 Хотя это событие указало на присутствие вируса Эбола леса Тай в Западной Африке, этот субрегион не считался территорией, на которой EBOV является эндемическим.
    10 марта 2014 года больницы и службы здравоохранения в Гекеду и Месенте уведомили Министерство здравоохранения Гвинеи, а через 2 дня организацию «Врачи без границ» в

    Гвинее о кластерах загадочного заболевания, характеризующегося лихорадкой, тяжелой диареей, рвотой и явно высоким уровнем смертности. («Врачи без границ» работали над проектом по малярии в Гекеду с 2010 года.) В Гекеду было госпитализировано восемь заболевших; трое из них умерли; были зарегистрированы другие смертельные случаи в семьях больных. Несколько смертельных случаев было зарегистрировано в Масенте, в том числе среди сотрудников больницы. Команда, присланная министерством здравоохранения, прибыла в район вспышки 14 марта (Рис. 1). Была уведомлена организация «Врачи без границ» в Европе, которая направила команду, прибывшую в Гекеду 18 марта. Были начаты эпидемиологические исследования; образцы крови были собраны и отправлены на вирусологический анализ в лаборатории с уровнем биобезопасности 4 в Лионе, Франция, и Гамбурге, Германия.


    Рисунок 1. Карта Гвинеи, на которой показаны места, где впервые произошла вспышка заболевания, вызванного вирусом Эбола.
    Охваченная вспышкой территория выделена красным цветом. Показана также главная дорога между охваченной вспышкой территорией и Конакри, столицей Гвинеи. Карта составлена по карте Организации Объединенных Наций.

    Методы

    Пациенты

    Образцы крови были получены от 20 пациентов, госпитализированных в Гекеду, Масенте и Киссидугу с лихорадкой, диареей, рвотой или кровоизлияниями. Демографические и клинические данные о пациентах были указаны на формах запроса из лабораторий. Клинические данные не собирались на систематической основе. Эта работа проводилась в рамках ответных здравоохранительных мероприятий по сдерживанию вспышки в Гвинее; информированное согласие получено не было.


    Диагностические анализы

    Вирусную РНК экстрагировали из 50-100 мкл неразбавленной плазмы и плазмы, разбавленной 1:10, с помощью набора для экстракции вирусной РНК QIAmp (Qiagen). Тесты на основе амплификации нуклеиновых кислот для обнаружения филовирусов и аренавирусов проводились с использованием имеющихся в продаже наборов и опубликованных праймеров и зондов5-11 (Таблица S1 в Дополнительном приложении, доступном с полным текстом данной статьи на сайте NEJM.org).


    Секвенирование вируса

    Фрагменты, амплифицированные с помощью праймеров, специфичных для гена L филовирусов, были секвенированы с использованием праймеров для полимеразной цепной реакции (ПЦР). Полные геномы EBOV были секвенированы непосредственно с использованием РНК, выделенной из сыворотки, полученной от трех пациентов с высокими уровнями вирусной РНК, измеренными в анализе на основе ПЦР в реальном времени с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР). Геном был амплифицирован в перекрывающихся фрагментах с использованием праймеров, специфичных для EBOV. Фрагменты были секвенированы с обоих концов обычным методом Сэнгера. Последовательность контигов была подтверждена путем визуального осмотра электрофореграмм.


    Выделение вируса

    Около 100 мкл всех образцов сыворотки использовали для инокуляции клеток Vero E6, поддерживаемых в колбах объемом 25 см2 со средой Игла, модифицированной по способу Дульбекко, содержащей 2-5% фетальной сыворотки теленка и пенициллин-стрептомицин. Клетки и супернатант пассировали несколько раз. За ростом вируса в клетках налюдали с помощью иммунофлуоресценции с использованием специфических поликлональных мышиных анти-EBOV антител в сыворотке мышей, зараженных EBOV, или на основе повышения уровней вируса в супернатанте клеточной культуры на несколько порядков величины, измеренного методом ОТ-ПЦР в реальном времени.


    Электронная микроскопия

    Образцы от двух пациентов готовили для электронной микроскопии с помощью стандартной процедуры отрицательного окрашивания. Каплю сыворотки в разведении 1:10 адсорбировали на медной сетке, покрытой углеродом, зажженным электрическим разрядом, и окрашивали свежеприготовленной 1% фосфовольфрамовой кислотой (Agar Scientific). Снимки делали при комнатной температуре с помощью электронного микроскопа Tecnai Spirit (FEI), снабженного нитью LaB6 и работающего при ускоряющем напряжении 80 кВ.


    Филогенетический анализ

    Мы получили все 48 полных геномных последовательностей филовирусов, имеющихся в настоящее время в GenBank, и выровняли их с новыми гвинейскими последовательностями EBOV (18959 нуклеотидов). Мы применяли программное обеспечение, предназначенное для проведения статистического отбора наиболее подходящих моделей замены нуклеотидов (jModelTest12), чтобы определить общую обратимую во времени модель эволюции последовательностей с гамма-распределенной вариацией уровней между сайтами (GTR+gamma) в качестве модели, наилучшим образом описывающей филогенетическое данные. Мы использовали метод Монте-Карло с байесовским подходом и цепью Маркова, который реализуется в программе MrBayes 3.1.2,13 чтобы вывести состав одного филогенетического дерева, используя два прогона четырех цепей с 1 млн. шагов с уровнем отжига 25% и модель GTR+gamma. Второе дерево было выведено для того же выравнивания методом максимального правдоподобия, реализованным в программе PhyML14 в рамках гамма-модели с 1000 бутстраповских повторов.


    Эпидемиологические исследования

    Мы собрали данные о возможных цепях передачи на основе больничных записей и путем интервьюирования пациентов с подозрением на инфицирование EBOV, а также контактных лиц, членов семей, жителей деревень, в которых произошли смертельные случаи, служащих похоронных бюро, руководителей здравоохранения и сотрудников больниц.


    Результаты

    Идентификация штамма EBOV

    С целью обнаружения возбудителя мы проводили традиционные анализы на основе ОТ-ПЦР, специфичные для Filoviridae, нацеленные на консервативную область в гене L, для тестирования образцов, полученных от 20 госпитализированных пациентов с подозрением на инфицирование вирусом геморрагической лихорадки.5, 6,9 Кроме того, мы провели анализы на основе ОТ-ПЦР в реальном времени, специфичные для EBOV, нацеленные на ген гликопротеина (GP) или нуклеопротеина (NP).7, 10 Образцы от 15 из 20 пациентов дали положительные результаты в традиционном анализе гена L на основе ПЦР и в анализах в реальном времени (Таблица 1). EBOV был выявлен в сыворотке одного пациента с помощью электронной микроскопии (Рис. 2, вставка) и был выделен в культуре клеток 5 пациентов. Ни один образец не дал положительного результата на вирус Ласса в анализах на основе ОТ-ПЦР, специфичных для вируса Ласса.8, 11 Секвенирование фрагментов, амплифицированных с помощью анализов гена L на основе ОТ-ПЦР, выявило последовательности EBOV. Частичные последовательности гена L были идентичны во всех подтвержденных случаях, за исключением синонимичного полиморфизма Т-C в позиции 13560, который был обнаружен у пациентов С12 и С14.


    Таблица 1. Демографические, клинические и вирусологические характеристики 15 пациентов с подтвержденным заболеванием, вызванным вирусом Эбола, во время вспышки 2014 года в Гвинее.*


    № пациента

    Возраст (годы)

    Пол

    Больница

    Дата взятия образца

    Симптомы

    Исход

    Дата смерти

    Выделение вируса

    Рег. № в GenBank

    C1

    20

    Ж

    Гекеду

    12 марта

    Лихорадка, диарея, рвота

    Летальный

    18 марта

    Нет

    н.о.

    C2

    25

    Ж

    Гекеду

    13 марта

    Лихорадка, диарея, рвота

    Летальный

    25 марта

    Нет

    н.о.

    C3

    35

    М

    Гекеду

    13 марта

    Лихорадка, рвота

    Летальный

    17 марта

    Нет

    н.о.

    C4

    25

    М

    Гекеду

    18 марта

    Лихорадка, диарея, рвота, кровоизлияния

    Летальный

    18 марта

    Нет

    н.о.

    C5

    16

    Ж

    Гекеду

    19 марта

    Самопроизвольный аборт

    Выжила



    Да

    KJ660348

    C6

    27

    Ж

    Гекеду

    20 марта

    Лихорадка, диарея, рвота

    Летальный

    н.о.

    Нет

    н.о.

    C7

    47

    Ж

    Гекеду

    20 марта

    Лихорадка, диарея, рвота

    Летальный

    22 марта

    Да

    KJ660347

    C8

    29

    М

    Масента

    16 марта

    Лихорадка, кровоизлияния

    Летальный

    16 марта

    Нет

    н.о.

    C9

    55

    Ж

    Масента

    16 марта

    Лихорадка, диарея, рвота

    Летальный

    19 марта

    Нет

    н.о.

    C10

    17

    М

    Масента

    16 марта

    Лихорадка, диарея, рвота

    н.о.

    н.о.

    Нет

    н.о.

    C11

    7

    М

    Масента

    н.о.

    Лихорадка, диарея, рвота

    Летальный

    26 марта

    Нет

    н.о.

    C12

    30

    М

    Масента, Нзерекор

    28 февраля

    Лихорадка, рвота

    Летальный

    26 февр.

    Да

    н.о.

    C13

    50

    М

    Масента

    12 марта

    Лихорадка, диарея, рвота

    Летальный

    12 марта

    Да

    н.о.

    C14

    41

    М

    Масента, Нзерекор

    13 марта

    Лихорадка, диарея, рвота, кровоизлияния

    Летальный

    16 марта

    Нет

    н.о.

    C15

    28

    Ж

    Киссидугу

    17 марта

    Лихорадка, диарея, рвота, кровоизлияния

    Выжила



    Да

    KJ660346

    * Взятие всех образцов и регистрация состояния пациентов были проведены в 2014 году. н.о. означает «не определяли».


    Рисунок 2 Цепи передачи во время вспышки заболевания, вызванного вирусом Эбола, в Гвинее.

    Показаны цепи передачи во время вспышки заболевания, вызванного вирусом Эбола, включая лабораторно подтвержденные случаи. Предполагаемые пути передачи вируса Эбола Заир (EBOV), выявленные путем эпидемиологического исследования, показаны сплошными стрелками. Пунктирные стрелки означают, что эпидемиологические связи не установлены. Лабораторно подтвержденные случаи (C) обозначены красными кружками, а случаи подозрения (S) указаны вместе с номерами пациентов. Изображение на вставке - скан гвинейского штамма EBOV в крови пациента, выполненный с помощью электронного микроскопа. Показаны типичная целая вирусная частица, концы которой помечены стрелками, и две разрушенные частицы (концы стрелок) (масштаб -100 нм).








    Деревня Мелианду, Гекеду

    9 летальных исходов с 2 декабря 2013 года по 8 февраля 2014 года

    2 летальных исхода 26 марта 2014 года
    Первые случаи заболевания, зарегистрированные во время вспышки

    (S1) Ребенок в возрасте 2 лет

    Лихорадка, черный стул, рвота

    Начало 2 декабря 2013 года; умер 6 декабря 2013 года






    Деревня Данду Помбо, Гекеду

    6 летальных исходов с 11 февраля по 31 марта 2014 года

    (S13) Член семьи, уход за S6
    Лихорадка, кровоизлияния

    Начало 4 февраля 2014 года; смерть наступила 11 февраля 2014 года





    Деревня Гбанду, Гекеду

    3 летальных исхода с 9 марта по 12 марта 2014 года




    (S2) Сестра S1, в возрасте 3 лет

    Лихорадка, черный жидкий стул, рвота

    Начало 25 декабря 2013 года; умерла 29 декабря 2013 года

    (S3) Мать S1 и S2

    Кровотечение

    Умерла 13 декабря 2013 года

    (S4) Бабушка S1 и S2

    Лихорадка, диарея, рвота

    Умерла 1 января 2014 года

    (S5) Медсестра

    Лихорадка, диарея, рвота

    Начало 29 января 2014 года; умерла 2 февраля 2014 года

    (S6) Деревенская акушерка

    Лихорадка

    Госпитализирована в Гекеду 25 января 2014 года;

    Умерла 2 февраля 2014 года





    Деревня Дава, Гекеду

    8 летальных исхода с 26 января по 27 марта 2014 года


    (S7) Сестра S4, присутствовала на похоронах S4

    Лихорадка, диарея, рвота, кровоизлияния

    Начало 20 января 2014 года; умерла 26 января 2014 года

    (S8) присутствие на похоронах S4

    Лихорадка, кровотечение

    Начало 25 января 2014 года; смерть наступила 30 января 2014 года







    (S9–S12)

    Начало 2–16 февраля 2014 года; смерть наступила 11 февраля – 5 марта 2014 года



    Гекеду




    S6


    Район Баладу Гекеду

    Начало 23 февраля 2014 года

    14 летальных исходов с 1 марта по 31 марта 2014 года



    Район Фарако Гекеду

    Начало 24 февраля 2014 года

    4 летальных исхода с 28 февраля по 25 марта 2014 года Теща (или свекровь) S14; умерла 22 марта 2014 года




    Члены семьи S14



    Медицинский работник в больнице Гекеду

    Лихорадка, диарея, рвота

    Начало 5 февраля 2014 года

    Ездила в больницу Масенты;

    Умерла 10 февраля 2014 года




    Киссидугу

    5 летальных исходов с 7 марта по 26 марта 2014 года

    (S16) Брат S15

    Лихорадка, рвота

    Начало 24 февраля 2014 года; умер 7 марта 2014 года

    (S17) Брат S15

    Лихорадка, рвота, икота

    Начало 24 февраля 2014 года; переведен ил больницы Гекеду в Киссидугу; умер 8 марта 2014 года






    Масента

    15 летальных исходов с 10 февраля по 29 марта 2014 года



    (S15) Врач больницы в Масента; ухаживал за S14

    Рвота, кровотечение, икота

    Начало 19 февраля 2014 года; умер 24 февраля 2014 года

    Похороны в Киссидугу














    Контакт с S15 и зараженными членами семьи S15

    Начало 3 марта 2014 года; умер

    12 марта 2014 года

    Еще 2 смертельных случая в семье



    Член семьи S15 и

    контакт с S14

    Умер 28 февраля 2014 года в Нзерекоре


    Контакт с C12 в Масенте

    Госпитализирован в Масенте 6 марта

    2014 года

    Умер 16 марта 2014 года в Нзерекоре




    << предыдущая страница   следующая страница >>